文章目录

1 材料与方法

1.1 研究对象

1.2 主要试剂

1.3 细胞的培养

1.4 慢病毒的包装及感染

1.5 黑色素瘤疫苗免疫鼠实验

1.6 NK细胞细胞毒活性的检测

1.7 CTL抗肿瘤效应的检测

1.8 补体依赖的细胞毒活性(complement depen dent cytotoxicity, CDC)的检测

1.9 FACS检测免疫鼠脾脏CD4+、CD8+T细胞百分比

1.10 ELISA检测免疫鼠血清IFN-γ和TGF-β水平

1.11 统计学处理

2 结果

2.1 慢病毒感染B16F10细胞及稳定感染株的筛选

2.2 qRT-PCR和Western blotting检测稳定感染株中ROR1mRNA及蛋白的表达

2.3 黑色素瘤疫苗免疫鼠实验

2.4 qRT-PCR和Western blotting检测各组免疫鼠肿瘤组织中ROR1mRNA及蛋白的表达

2.5 NK细胞细胞毒活性的检测

2.6 CTL细胞毒效应的检测

2.7 FACS检测免疫鼠脾脏中CD4+和CD8+T细胞百分比

2.8 CDC实验检测抗体杀瘤活性

2.9 ELISA检测免疫鼠血清中IFN-γ和TGF-β分泌水平

3 讨论

文章摘要:黑色素瘤细胞高表达受体酪氨酸激酶样孤儿受体1（receptor tyrosine kinase like orphan receptor 1, ROR1）,其可促进肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移,是治疗黑色素瘤的重要靶标。为探讨下调黑色素瘤细胞ROR1表达对制备的黑色素瘤疫苗抗瘤效应的影响,通过慢病毒载体shRNA下调B16F10细胞ROR1分子表达。反复冻融各实验组B16F10细胞制备疫苗,免疫C57BL/6小鼠3次后,用B16F10细胞攻击小鼠,以评价免疫鼠的免疫系统活性和抗肿瘤效应。结果显示,与对照组相比,shROR1/B16F10细胞ROR1分子表达水平显著降低（P<0.01）,用其制备疫苗免疫小鼠会抑制免疫系统对肿瘤细胞的攻击及机体抗瘤效应。由此,ROR1是黑色素瘤疫苗的重要靶点,下调ROR1表达将导致黑色素瘤疫苗免疫活性减弱而影响免疫鼠抗黑色素瘤效应。

文章关键词:

论文分类号:R739.5