文章目录

1 材料与方法

1.1 材料

    1.1.1 菌株

    1.1.2 主要试剂及仪器

1.2 方法

    1.2.1 噬菌体的分离纯化

    1.2.2 噬菌体电镜观察

    1.2.3 基因组提取及核酸类型确定

    1.2.4 噬菌体生物学特性分析

        1.2.4.1 噬菌谱测定

        1.2.4.2 最佳感染复数(MOI)测定

        1.2.4.3 一步生长曲线

        1.2.4.4 热稳定性测定

        1.2.4.5 酸碱稳定性测定

    1.2.5 环境杀菌效果评估

        1.2.5.1 液体杀菌效果评估

        1.2.5.2 载体(鸡粪)杀菌效果评估

    1.2.6 统计分析

2 结 果

2.1 噬菌体的分离纯化

2.2 噬菌体电镜观察结果

2.3 基因组提取及核酸类型确定

2.4 噬菌体生物学特性测定结果

    2.4.1 噬菌谱测定结果

    2.4.2 最佳感染复数测定结果

    2.4.3 一步生长曲线测定结果

    2.4.4 热稳定性测定结果

    2.4.5 酸碱稳定性测定结果

2.5 噬菌体ФECP2-1环境杀菌效果评估

    2.5.1 液体杀菌效果评估

    2.5.2 载体(鸡粪)杀菌效果评估结果

3 讨 论

4 结 论

文章摘要:【目的】探索噬菌体作为控制养殖环境致病性大肠杆菌的新手段。【方法】本研究进行了大肠杆菌噬菌体的分离及相应指标评估。通过双层平板法从养殖环境中分离禽致病性大肠杆菌裂解性噬菌体。通过电镜及酶切鉴定、温度及酸碱稳定性、最佳感染复数、一步生长曲线及其在模拟环境中的杀菌效果对该噬菌体进行综合性评估。【结果】分离得到的噬菌体具有正多面体的头部和细而长的尾部结构,头部直径约98 nm,尾部长约123 nm,结合酶切鉴定结果初步判定该噬菌体为肌尾科双链DNA噬菌体。该噬菌体的温度耐受范围为37～50℃;酸碱耐受范围为pH 3.0～11.0。当感染复数为0.00001时产生的子代噬菌体滴度最高;一步生长曲线测定结果显示,该噬菌体潜伏期为20～40 min,裂解时间为80～100 min,裂解量为4 133 PFU/cell。从该噬菌体对模拟环境中宿主大肠杆菌的杀菌效果可看出,浓度为1×10⁴～1×10⁶ PFU/mL的噬菌体ФECP2-1对液体中目标大肠杆菌作用1～6 h,杀菌率均在99.9%以上;浓度为2×10⁴～2×10⁶ PFU/g的噬菌体ФECP2-1对鸡粪中目标大肠杆菌作用5～10 h,杀菌率均在99%以上,该噬菌体对鸡粪中目标大肠杆菌杀菌效果略低于对液体中目标大肠杆菌的杀菌效果。【结论】ФECP2-1符合噬菌体类消毒剂相关特征,是一株具有良好应用前景的噬菌体,可作为一种生物消毒剂应用于养殖环境中禽大肠杆菌的防控。

文章关键词:

论文DOI:10.16431/j.cnki.1671-7236.2022.02.041

论文分类号:S852.61