文章目录

文题释义：

0引言Introduction

1 材料和方法Materials and methods

1.1 设计

1.2 时间及地点

1.3 材料

    1.3.1 脐带

    1.3.2 实验试剂

    1.3.3 实验仪器

1.4 实验方法

    1.4.1 人脐带间充质干细胞的提取分离、培养和扩增

    1.4.2 三维球形培养方法

    1.4.3 实验分组

1.5 主要观察指标

    1.5.1 细胞形态观察

    1.5.2 扫描电镜观察细胞球表征

    1.5.3 死活染色观察细胞球存活情况

    1.5.4 Alamar Blue检测细胞增殖情况

    1.5.5 流式细胞术检测免疫表型

    1.5.6 免疫荧光检测多能性转录因子的表达

    1.5.7 Western blot检测多能性转录因子的表达

1.6 统计学分析

2 结果Results

2.1 细胞形态学观察结果

2.2 细胞增殖能力检测结果

2.3 人脐带间充质干细胞免疫表型表达

2.4 人脐带间充质干细胞的多能性转录因子表达

3 讨论Discussion

文章摘要:背景:人脐带间充质干细胞提取方法主要有酶消化法和组织块贴壁法,明确两种方法提取的细胞在二维、三维培养下的生物学特性,对组织工程中种子细胞提取方法及培养方式的选择具有重要意义。目的:比较酶消化法和组织块贴壁法提取的人脐带间充质干细胞在二维、三维培养下的生物学特性。方法:酶消化法和组织块贴壁法分离人脐带间充质干细胞,扩增培养至第3代进行二维、三维培养;扫描电镜观察细胞球表征;死活染色观察细胞球存活情况;Alamar Blue检测细胞增殖能力;流式细胞术检测免疫表型CD34、CD44、CD45、CD90、CD105的表达;免疫荧光、免疫印迹检测多能性转录因子Sox2、Nanog、Oct4表达。结果与结论:（1）酶消化法比组织块贴壁法获取细胞时间更短,二维培养下组织块贴壁法的细胞增殖能力优于酶消化法,但在三维培养条件下细胞增殖缓慢且无差异。三维培养3 d后细胞成紧密球体,存活良好。（2）两种方法提取的细胞在二维、三维培养条件下均表达CD44、CD90、CD105,不表达CD34、CD45。二维培养下,酶消化法提取细胞的CD105表达高于组织块贴壁法;三维培养下,酶消化法提取细胞的CD90、CD105表达也高于组织块贴壁法。（3）二维和三维培养下两种方法提取细胞均表达多能性转录因子Sox2、Nanog、Oct4。二维培养下,酶消化法提取细胞3个转录因子表达均高于组织块贴壁法;但三维培养下,组织块贴壁法提取细胞Sox2的表达高于酶消化法,Nanog、Oct4的表达两组间无差异。

文章关键词:

论文分类号:R329.2