文章目录

1 材料与方法

1.1 实验动物

1.2 实验试剂

1.3 实验仪

1.4 动物分组及实验干预

1.5 Western印迹检测mTOR、p-mTOR、Akt、p-Akt(Ser473)、p65、p-p65蛋白表达

1.6 苏木素-伊红(HE)及Masson染色观察

1.7 免疫组化检测CK19、Ki67等指标

1.8 qRT-PCR检测白细胞介素(IL)-6、 单核细胞趋化蛋白(MCP)-1、IL-10、精氨酸(Arg1)等指标

1.9 统计学方法

2 结 果

2.1 肝脏大体观

2.2 各组ALT、ALP和TBIL水平

2.3 Western印迹检测各组肝脏组织mTOR、Akt、p65的磷酸化水平

2.4 HE和Masson染色结果

2.5 免疫组织化学法检测各组小鼠肝脏组织胆管增生情况

2.6 qRT-PCR结果显示

3 讨 论

文章摘要:目的探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路在3,5-二乙氧基羰基-1,4-氢-尿嘧啶（DDC）诱导的胆管损伤中的作用。方法 24只雌性C57BL/6J小鼠随机分为N-甲基呲咯烷酮（NMP）组、mTOR抑制剂（Torin1）处理组（Torin1组）、NMP+DDC组、Torin1+DDC组,每组6只小鼠。DDC组给予3 w 0.1%DDC饲料喂养,4组小鼠均在造模第1天通过腹腔注射的方式给予NMP或Torin1处理,每2 d注射1次,连续3 w。血清学检测肝功能变化情况;苏木素-伊红（HE）和Masson染色检测胆管增生、炎性细胞浸润及肝脏纤维化程度;免疫组织化学法检测肝脏（Ki67）和细胞角蛋白（CK19）的表达;qRT-PCR检测肝组织炎症相关基因白细胞介素（IL）-6、单核细胞趋化蛋白（MCP）-1、IL-10、精氨酸（Arg）1的表达;Western印迹检测mTOR信号通路活化表达情况。结果与NMP组和Torin1组相比,NMP+DDC组血清谷丙转氨酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）、总胆红素（TBIL）均明显升高,肝脏炎症细胞浸润、胆管增生及肝纤维化病变严重,IL-6、MCP-1和Arg1 mRNA表达明显升高,IL-10明显下降。而Torin1处理后,IL-6和MCP-1 mRNA表达明显下调,IL-10和Arg1 mRNA的表达明显升高。Western印迹检测结果显示NMP+DDC组p-mTOR、p-蛋白激酶B（Akt）、p-p65的表达相比于NMP组和Torin1组明显升高,而注射Torin1则抑制该信号通路的活化。结论 mTOR/AKT/核因子（NF）-κB信号通路参与DDC诱导小鼠胆管损伤的发生发展,抑制该信号通路可以减轻肝胆管的损伤。

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