文章目录

1 资料与方法

1.1 生物信息分析

1.2 组织标本

1.3 细胞和主要试剂

1.4 小干扰RNA下调肠癌细胞中MALAT1表达并观察细胞表型变化

    1.4.1 小干扰RNA转染

    1.4.2 转染效率检测

    1.4.3 细胞划痕实验

    1.4.4 Transwell小室侵袭实验

    1.4.5 Western blotting 实验

1.5 统计学分析

2 结果

2.1 MALAT1表达水平分析

2.2 MALAT1突变分析

2.3 MALAT1生物学功能

2.4 抑制MALAT1表达可抑制SW620细胞上皮间质化标志物的表达

2.5 MALAT1表达与患者预后的关系

3 讨论

文章摘要:目的:探讨lncRNA MALAT1在结直肠癌（colorectal cancer, CRC）中的表达、生物学功能及其与患者预后的关系。方法:采用生物信息方法在TCGA数据库和Oncomine数据库中分析比较MALAT1在CRC患者癌组织和癌旁组织中的差异表达情况,并比较高低表达组患者总生存期（OS）和无病生存期（DFS）是否存在差异。采用cBioPortal在线分析TCGA数据库中MALAT1突变种类及频率。采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time PCR）技术检测我院收治并手术治疗的30例CRC患者手术切除标本的癌组织、癌旁组织、肠癌细胞系（SW620、LOVO、HCT116）及正常人肠上皮细胞（NCM460）中MALAT1的相对表达水平。小干扰RNA敲低SW620细胞中MALAT1表达后观察MALAT1细胞迁移和侵袭能力改变情况。siRNA下调SW620细胞MALAT1,利用免疫印迹实验检测上皮间质化标志物E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达水平。结果:Oncomine数据库中,CRC患者癌组织中高表达MALAT1的研究有6项;30对人配对CRC组织标本中,相比癌旁组织,MALAT1在46.7%（14/30）的CRC患者组织中表达增高（P<0.05）;Real-time PCR结果显示,肠癌细胞系（SW620、LOVO、HCT116）中MALAT1的相对表达量显著高于正常人肠上皮细胞（NCM460）,差异有统计学意义（P<0.05）。MALAT1基因突变类型主要为融合突变、扩增突变及深度缺失突变,其在各种肿瘤中的总体突变率为1.1%,在CRC组织中的突变率为0.34%。小干扰RNA抑制MALAT1表达可明显抑制SW620细胞的划痕迁移与小室侵袭能力。抑制MALAT1表达后,SW620细胞中E-cadherin的表达水平升高,同时N-cadherin和Vimentin的表达水平明显降低,表明上皮间质化过程受到明显抑制。MALAT1表达水平与结肠癌患者DFS存在明显的关系,高表达患者DFS显著低于低表达患者（HR=1.6,P=0.044）。结论:lncRNA MALAT1在肠癌中表达上调,并通过抑制上皮间质化抑制细胞迁移和侵袭能力。MALAT1高表达结肠癌患者预后不良,可能成为结肠癌预后分子标志物。

文章关键词:

论文分类号:R735.34