文章目录

1 材料与方法

1.1 细胞、病毒、实验动物和主要试剂

1.2 重组表达质粒p ET28a-SVA-VP031的构建与鉴定

1.3 重组蛋白的诱导表达与纯化

1.4 Western blotting (WB)鉴定重组蛋白

1.5 His-SUMO融合标签的去除及SVA VLPs鉴定

1.6 VLPs的免疫程序

1.7 中和效价的测定

1.8 免疫血清中抗原特异性抗体的检测

2 结果与分析

2.1 p ET28a-SVA-VP031质粒酶切鉴定

2.2 重组蛋白的诱导表达和可溶性分析

2.3 重组蛋白的纯化和鉴定

2.4 VLPs透射电镜鉴定

2.5 SVA VLPs的免疫效果

3 讨论

文章摘要:为了研制A型塞内卡病毒（Senecavirus A,SVA）的病毒样颗粒（Virus-like particles,VLPs）疫苗,以SVA田间流行毒株CH-FJ-2017结构蛋白基因序列为研究对象,构建了能够同时表达SVA的3种结构蛋白VP0、VP1和VP3的单个原核重组表达质粒pET28a-SVA-VP031。通过大肠杆菌Escherichia coli表达、亲和层析纯化和体外自组装,获得SVA VLPs。透射电子显微镜鉴定显示,SVA的3种结构蛋白在体外能够自组装成直径约25–30 nm的VLPs,并且动物免疫试验结果表明,该VLPs能够有效刺激豚鼠产生高水平的抗原特异性中和抗体。上述研究结果为SVA VLPs疫苗的研制奠定了基础。

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