文章目录

1 材料与方法

1.1 材料

    1.1.1 主要试剂血液/细胞/组织基因组

    1.1.2 主要仪器

    1.1.3 样品采集

1.2 方法

    1.2.1 光学显微镜镜检

    1.2.2 分子生物学检测

    1.2.3 克隆测序及系统发育树构建分析

2 结果与分析

2.1 光学显微镜镜检

2.2 分子生物学检测

2.3 序列分析

2.4 种系发育树分析

3 讨论

文章摘要:住肉孢子虫病严重影响畜牧业健康发展,危害肉制品和公共卫生安全。为研究西藏拉萨市临近各县牛羊住肉孢子虫流行情况及虫种鉴定,对西藏拉萨市当雄县和尼木县的牦牛、绵羊、山羊、黄牛、犏牛等共62头（只）牛羊的心肌、膈肌、腿肌、食道肌进行采样。采用压片镜检法对采集的牛羊膈肌进行观察检测,若发现住肉孢子虫包囊即判定为阳性,否则为阴性。采用PCR技术对住肉孢子虫线粒体细胞色素C氧化酶第一亚基（COX1）进行扩增,对62头（只）牛羊的心肌、膈肌、腿肌、食道肌进行检测。结果显示,PCR检测的住肉孢子虫病的阳性率与压片镜检法结果一致,藏牛羊的住肉孢子虫阳性率70.97%;对膈肌PCR产物进行克隆测序,在NCBI上进行同源性比对,共检出4个住肉孢子虫虫种,分别为肉孢子虫（Sarcocystis pilosa）、山羊犬住肉孢子虫（Sarcocystis capracanis）、羊柔嫩住肉孢子虫（Sarcocystis tenella）和家山羊犬肉孢子虫（Sarcocystis hircicanis）,对应样品编号分别为5C、17C、19C和27C,其同源性分别为92.10%、99.71%、99.81%和99.26%;种系发育树结果显示,样品5C、17C、19C、27C与其NCBI上同源性最高的住肉孢子虫虫种Sarcocystis pilosa、Sarcocystis capracani、Sarcocystis tenella和Sarcocystis hircicanis处于同一分支上,且系统发育树中的Bootstrap值较高,很好地证明了研究结果中所确定的分类地位,两者确定为同一种属。另外,在牦牛身上检出了Sarcocystis pilosa,为进一步了解Sarcocystis pilosa生活史提供了线索。

文章关键词:

论文分类号:S852.723