文章摘要:为了揭示苜蓿轮枝菌Verticillium alfalfae的生物学特性及其致病机理，在室内条件下测定不同温度、pH值、碳源和氮源对菌株Ms198的生长速率和产孢量的影响，同时利用农杆菌转化法（Agrobactirium tumfacience-mediated transformant,ATMT）将带有潮霉素（Hygromycin,Hyg）抗性标记和绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）报告基因的双元载体转入苜蓿轮枝菌的分生孢子，获得147株阳性转化子，以野生型菌株为对照，对挑取的15株阳性转化子的菌落形态、生长速率、产孢量、孢子萌发率、粗毒素分泌量和致病力进行研究。结果表明，苜蓿轮枝菌具有较宽的温度和酸碱度适应范围，最适生长和产孢温度分别为25℃和20℃，最适生长pH值为6～9，最适产孢pH值为9。可以利用多种碳、氮源，最适生长的碳、氮源分别为可溶性淀粉和牛肉膏，最适产孢的碳、氮源分别为D-牛乳糖和胰蛋白胨。与野生型菌株相比，15株供试转化子中有66.67%的转化子在菌落形态方面与野生型菌株无明显差别，而其生长速率、产孢量和孢子萌发率均有不同程度的降低。在产毒能力和致病力方面，1株转化子的粗毒素分泌量显著高于野生型菌株，9株显著低于野生型菌株，其余5株与野生型菌株无显著差异；4株转化子的致病力显著低于野生型菌株，其余11株转化子的致病力与野生型菌株均无显著差异。研究结果表明，转化子的生物学特性以及产毒能力和致病力，随外源基因插入位点的随机性而有所变化。

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