文章摘要:为了获得大量纯度较高的猪FKBP5重组蛋白，本实验通过构建FKBP5原核表达载体，以实现FKBP5蛋白的大量表达，并对其进行纯化及鉴定。以荣昌猪胸腺cDNA为模板，PCR扩增FKBP5基因CDS区后，将其与pET-28a连接，获得pET-28a-FKBP5重组表达质粒，并将重组质粒转化进大肠杆菌感受态细胞BL21（DE3）中，获得包含pET-28a-FKBP5重组表达质粒的蛋白表达菌株；利用IPTG诱导蛋白表达，SDS-PAGE鉴定其表达情况，利用Ni柱亲和层吸法纯化蛋白，并对纯化的蛋白进行Western-blot鉴定。结果表明，实验成功构建了重组表达质粒pET-28a-FKBP5；表达产物SDS-PAGE和Western-blot鉴定结果显示，在51 ku附近出现特异性条带，表明纯化回收的蛋白确为目的蛋白；1 mmol/L的IPTG诱导2 h是诱导蛋白表达的最适条件。实验成功表达了大量纯度比较高的FKBP5蛋白，可为进一步研究FKBP5蛋白的生物学功能以及猪抗病育种研究提供理论依据。

文章关键词:FKBP5,载体构建,原核表达,蛋白纯化,鉴定,

项目基金:国家自然科学基金项目（31771376）,

论文作者:龙熙¹ 柴捷¹ 潘红梅¹ 王金勇¹ 张廷焕¹ 肖杰秋² 

作者单位:1. 重庆市畜牧科学院 2. 绥江县动物卫生监督所 

论文DOI: 10.19556/j.0258-7033.20201105-06

论文分类号: S828

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